背景介紹

Caco2細(xì)胞是常見的結(jié)腸腺癌細(xì)胞，正常情況下，Caco2細(xì)胞在培養(yǎng)的過程中貼壁生長，其形態(tài)多為多邊形或梭形，增殖速度較快，其鏡下形態(tài)如下圖所示，密度已大于90%，可以進(jìn)行傳代。

圖：Caco2細(xì)胞形態(tài)

培養(yǎng)方法

1.培養(yǎng)基配置：DMEM高糖培養(yǎng)基+10%胎牛血清+1%青霉素鏈霉素雙抗+1%谷氨酰氨。

2.其余需要準(zhǔn)備的試劑耗材包括：無菌PBS、胰酶、無菌槍頭、細(xì)胞培養(yǎng)皿、15ml離心管、離心機(jī)、生物安全柜、水浴鍋、75%酒精。

3.培養(yǎng)條件：37℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱。

4.細(xì)胞復(fù)蘇：提前將水浴鍋溫度調(diào)至37℃，從液氮罐中拿出細(xì)胞，迅速放在37℃水浴鍋中輕輕晃動，使細(xì)胞快速融化，融化后用移液器輕輕混勻，將其轉(zhuǎn)移到15ml離心管內(nèi)，加入1-2ml培養(yǎng)基，室溫800rpm離心5min，去上清后加入1ml培養(yǎng)基重懸10次左右，將其全部加入6cm細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)（提前加入4-6ml培養(yǎng)基），十字混勻后放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中，24h觀察細(xì)胞密度進(jìn)行后續(xù)操作。

5.細(xì)胞傳代：當(dāng)細(xì)胞密度≥90%時(shí)，進(jìn)行細(xì)胞傳代，吸掉原有培養(yǎng)基，沿培養(yǎng)皿邊緣加入1ml PBS清洗，吸掉PBS后加入750μl含EDTA的胰酶消化，消化時(shí)間2min左右，消化完成后加入1.5ml培養(yǎng)基中止消化，用移液槍吹打，保證細(xì)胞全部被吹下，將混合液全部轉(zhuǎn)移到離心管中，室溫800rpm離心5min，去上清后加入1ml培養(yǎng)基充分重懸，取333μl加入有4ml培養(yǎng)基的6cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，十字混勻后放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)，1-3天后根據(jù)細(xì)胞密度換液或傳代。

6.細(xì)胞凍存：如前述收集細(xì)胞沉淀，加入1ml凍存液（培養(yǎng)基：FBS：DMSO=7：2：1）充分重懸，將混合液移入凍存管內(nèi)，標(biāo)記好基本信息，將凍存管入凍存盒后放入-80℃冰箱，24h后可將凍存管放入-80℃冰箱細(xì)胞盒內(nèi)。

一些心得

1.細(xì)胞新復(fù)蘇后，一般24h進(jìn)行補(bǔ)液2ml，48h后再進(jìn)行傳代處理。對于新復(fù)蘇的細(xì)胞由于比較脆弱，一般第一次傳代比例為1：2。

2.Caco2細(xì)胞增殖較快，上述提到的333μl是按常規(guī)1：3的比例進(jìn)行傳代，最大比例應(yīng)不超過1：7。就我個(gè)人來說，1：3傳代2天即可長滿，僅作為參考。

3.對于新復(fù)蘇的細(xì)胞，若要凍存，最少應(yīng)該傳一代再進(jìn)行凍存。同樣如果要進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染等對細(xì)胞有較大傷害的操作時(shí)，最少應(yīng)該傳兩代，保證細(xì)胞質(zhì)量良好的情況下進(jìn)行。

4.細(xì)胞培養(yǎng)全程應(yīng)注意無菌操作，用到的試劑耗材均使用75%酒精消毒，同時(shí)也要對手部進(jìn)行消毒。

安培生物致力成為推動生命科學(xué)進(jìn)步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實(shí)力、先進(jìn)的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東，服務(wù)面向全國。安培生物集進(jìn)口試劑、實(shí)驗(yàn)室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線，在各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機(jī)構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。

 可以在第一時(shí)間為用戶提供比較先進(jìn)的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠?yàn)閺V大用戶提供強(qiáng)大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進(jìn)的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊(duì)伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時(shí)為客戶提供服務(wù)。