-
葉綠體被膜完整性的測定
發布時間： 2023-01-16 點擊次數： 1715次原理
由于玻璃氰-化-鉀不能透過被膜，故完整葉綠體在等滲介質中不能進行玻璃氰-化-鉀光還原的Hill反應。而失去完整被膜的葉綠體，鐵氰-化-鉀可以進入類囊體進行Hill反應。根據這一原理，比較脹破與未脹破的葉綠體Hill反應速率，就可計算葉綠體被膜的完整度。材料與儀器
植物材料
鐵氰-化-鉀 NH4Cl
氧電極測氧全套裝置 燒杯 微量進樣器 洗耳球步驟
1. 取0.1ml葉綠體提取液加到0.9ml的蒸餾水中并攪拌1min，使葉綠體被膜脹破，加1ml測定介質Ⅰ懸浮備用。
2. 取0.1ml未脹破葉綠體提取液加入反應杯中，視反應杯體積加入測定介質Ⅱ，加入適量鐵氰-化-鉀和NH4Cl，使鐵氰-化-鉀和NH4Cl的最終濃度都為1mmol/L。攪拌，平衡1min，照光測定Hill反應放氧速率，記錄5min，然后清洗反應杯。
3. 將已脹破葉綠體加入反應杯中，再加入適量測定介質Ⅱ、鐵氰-化-鉀和NH4Cl，使反應體系物質最終濃度同未脹破葉綠體測定體系，測定過程同2。
4. 分別計算脹破和未脹破的葉綠體測定體系中單位時間的放氧量（或Hill反應速率）。
5. 計算被膜完整度。
注意事項
1. 本實驗所用玻璃要存放在冰箱中，存放時間不宜過長，最好現配現用。
2. 葉綠體的分離要在0~4℃下進行，玻璃器皿和溶液都須預冷，操作要快，整個分離過程最好在5min內完成。
3. 離心過程中離心機的轉速不宜過高，否則葉綠體中的淀粉粒會打破葉綠體被膜。
4. 被膜完整度的測定過程中，反應杯內破碎葉綠體與完整葉綠體的葉綠素含量應相等。
常見問題
葉綠體的外膜和內膜合稱為被膜。葉綠體的外膜和內膜都是連續的單位膜, 每層膜的厚度為6～8nm, 內外兩膜間有10～20nm寬的間隙, 稱為膜間隙。與線粒體不同的是，葉綠體的內膜并不向內折成嵴, 但在某些植物中，內膜可皺折形成相互連接的泡狀或管狀結構，稱為周質網(peripheral reticulum)，這種結構的形成可增加內膜的表面積。以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。
安培生物科技有限公司介紹：
安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規模生物生產、基因和細胞治療領域客戶，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產，包括培養間充質干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養規模生產服務；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養可分解3D基質膠產品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫藥領域提供優質的產品和技術服務，努力發展為基因治療、細胞治療的生物科技企業。
- 下一篇：植物細胞的活體染色與死活鑒定
- 上一篇：細胞傷口愈合
銷售熱線
技術支持：化工儀器網 地址：深圳市寶安區新安街道寶民社區創業二路5號建設銀行樓創業二路5-1 管理登陸 sitemap.xml
微信二維碼
