步驟

1. 混合 10 ml 全血和 10 ml RPMI 生長培養(yǎng)基。
   
   生長培養(yǎng)基（RPMI1640 800 ml，FBS 200 ml，2 mmol/L-谷氨酰胺，5 μg/ml 兩性霉素，50 μg/ml 慶大霉素）
   
   2. 取 15 ml 無菌離心管，加 3 ml Histo-paque1077（Sigma），在其上加 4 ml 稀釋血，分離淋巴細胞。
   
   3. 室溫 300 g 離心 30 分鐘，棄上層清亮血漿。
   
   4. 收集不透明淋巴細胞層，細胞懸液倒入 50 ml 無菌離心管。
   
   5. 20 ml RPMI 1640 生長培養(yǎng)基洗兩次，室溫 300 g 離心 10 分鐘。
   
   6. 10 ml 血分離的細胞懸于 1.0 ml 含 EB 病毒的上清。
   
   7. 細胞懸液（1.0 ml）放入 25 cm2 組織培養(yǎng)瓶，垂直放置，37℃ 5% CO2 孵育 1~3 小時。
   
   8. 孵育后，加入 3 ml 含 0.2 μg/ml 刀豆凝集素A 的 RPMI 1640 生長培養(yǎng)基，水平放置，使細胞均勻分布于全生長面。
   
   9. 每周加 1 ml 含刀豆凝集素A 的新鮮 RPMI 1640 生長培養(yǎng)基，不要吸出原培養(yǎng)基。

以上就是本期的內容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網站鏈接了解更多技術與產品資訊。

安培生物科技有限公司介紹：

安培生物堅持為生命科學研究、活體動物轉染、大規(guī)模生物生產、基因和細胞治療領域客戶，提供*細胞體內可代謝的核酸轉染試劑；inviCELL™Platelet lysate無動物血清產品旨在支持廣泛的細胞擴增和生產，包括培養(yǎng)間充質干細胞和多種免疫細胞系等，為制藥公司或者生物技術公司提供無血清細胞培養(yǎng)規(guī)模生產服務；提供以植物生物為平臺基因序列全人源化、*的細胞培養(yǎng)可分解3D基質膠產品；提供內毒素≦ 1.0 EU/mL、對細胞無毒性影響、高純度的一型膠原蛋白產品。安培生物專注為生物醫(yī)藥領域提供優(yōu)質的產品和技術服務，努力發(fā)展為基因治療、細胞治療的生物科技企業(yè)