培養細胞最擔心的就是細胞污染，這期繼續分享如何辨別細胞污染的經驗。

★識別支原體污染

這是一種很難發現卻經常存在的問題。

• 支原體是最小的（0.3 μm）能夠自我復制的有機體，倒置顯微鏡下通常觀察不到。

• 支原體沒有細胞壁，對常用的抗生素不敏感。支原體感染是極為不易察覺的，可能直到出現了可以觀察到的病變或發現細胞正常功能喪失的時候，才意識到是發生了支原體感染。

• 在沒有采用特殊的染色方法，也沒有觀察到病變的情況下，實驗總是不成功，就應懷疑被支原體污染。預防支原體污染的惟-途徑是經常對細胞進行篩選。

   

★防止支原體感染

• 只使用那些證明沒有污染支原體的血清和培養基。

• 只接受那些保證沒有支原體感染的細胞。

注意：當你怎么樣也得不到一種細胞表面蛋白的抗體，或不能有效地表達某種蛋白質時，可能是由于使用了被支原體感染的細胞。

★檢測支原體感染

如果這株細胞對你十分重要，那么就應該每4~6周對細胞進行檢測，通常使用下面幾種方法：

●支原體的熒光染色是簡單、便宜也是常用的方法。

●使用支原體的特異引物進行PCR檢測。如果實驗室具備PCR儀和電泳條件，那么這種方法可能是尤為簡單的手段?？梢宰约涸O計引物（設計好恰當的對照），也可以從公司購買引物。

●把細胞樣品送到能進行支原體檢測的公司檢測。這樣做雖不如自己檢測快（盡管托給公司比較容易，但會很貴），只有一個好處就算是不用自己親自動手。

注意：如果你發現了支原體污染

●合適的方法是立即把細胞丟棄，從新復蘇。

●可以不理會它。

●可以采取某些挽救措施，但是會很困難，只適用于那些不可代替的細胞。簡單的方法是訂購除去支原體的試劑盒。

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