細胞轉(zhuǎn)染技術是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。其在研究基因功能、調(diào)控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等實驗和應用中使用越來越廣泛。然而，轉(zhuǎn)染效率低下卻一直是科研工作者們經(jīng)常遇到的一大難題。尤其是原代細胞轉(zhuǎn)染，更是因為難度大，效率低從而使得科研人員們頭痛不已，談“轉(zhuǎn)染"色變······

這里，小編根據(jù)收集做細胞轉(zhuǎn)染多年的經(jīng)驗和體會，總結(jié)出了以下導致細胞轉(zhuǎn)染效率低下，經(jīng)常“翻車"的大坑，以及避免掉坑里的一些做法。

影響細胞轉(zhuǎn)染效率的因素, 轉(zhuǎn)染中經(jīng)常翻車的點

影響轉(zhuǎn)染效率的因素有很多，細胞株本身的特性和活性，細胞培養(yǎng)條件，轉(zhuǎn)染的DNA 或RNA 的質(zhì)量， 轉(zhuǎn)染方法，轉(zhuǎn)染試劑的選擇等。

一、準備不充分、轉(zhuǎn)染條件不佳

一般情況下，做細胞轉(zhuǎn)染時除了必要的試劑、細胞和DNA等要準備充分外，實驗的條件和操作步驟要求等都應該嚴格遵守。比如：脂質(zhì)體的用量、DNA濃度、細胞密度、脂質(zhì)體和DNA混合孵育時間等。只有避免這些人為因素導致的低級錯誤才能更好地分析提高轉(zhuǎn)染效率的方法。

二、細胞問題：狀態(tài)不好、污染等

對于細胞轉(zhuǎn)染實驗，細胞自然是其中較為重要的實驗材料之一。在實驗室時，每次細胞轉(zhuǎn)染之前都要檢查細胞狀態(tài)和細胞密度是否合適。一般進行轉(zhuǎn)染的細胞應該是在對數(shù)生長期，如果不合適或細胞狀態(tài)太差，那寧可晚幾天做轉(zhuǎn)染，也不能盲目地去做實驗。否則只會偷雞不成蝕把米，大大影響后續(xù)的實驗結(jié)果。

三、轉(zhuǎn)染的DNA質(zhì)量不好：濃度太低、克隆不對等

當我們在做細胞轉(zhuǎn)染實驗時，需要轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒DNA的質(zhì)量也是影響轉(zhuǎn)染效率的一大因素。如果DNA的濃度太低、純度不夠或者含有細菌LPS或其他對細胞有毒害作用的物質(zhì)，也會導致我們轉(zhuǎn)染效率低下甚至失敗。此外值得注意的是，實驗中常常需要轉(zhuǎn)染的并不是質(zhì)粒DNA，而是RNA。對于轉(zhuǎn)染RNA而言，我們一般推薦Zeta Life公司Advanced系列轉(zhuǎn)染試劑，它的優(yōu)勢是市面上所有的RNA ，Zeta Life 公司Advanced系列轉(zhuǎn)染試劑都可以轉(zhuǎn)染。這是一種采用的是新型小分子多肽材料，其特點是非脂質(zhì)體材料，可通過細胞主動吞噬吸收進入細胞，進入細胞后可以被代謝。之所以選擇這一款產(chǎn)品，主要是由于其具有超高的轉(zhuǎn)染效率，對細胞無內(nèi)毒素影響，不易出現(xiàn)細胞死亡，易于優(yōu)化，具有出色的轉(zhuǎn)染效率，適用細胞種類多，以及簡單快速的實驗方案等優(yōu)點。

實驗過程中，只需在細胞融合度為在60%-80%時進行細胞轉(zhuǎn)染，質(zhì)粒DNA（或RNA）與轉(zhuǎn)染試劑直接1：1混合，無需分別稀釋再混合。全程使用含血清的*培養(yǎng)基，不需要轉(zhuǎn)染前后兩次更換培養(yǎng)基。使用簡單、快速且具有很高的轉(zhuǎn)染效率。

四、細胞本身轉(zhuǎn)染困難

對于細胞本身轉(zhuǎn)染困難這個問題，就并非人為原因了，細胞類型的不同相應的轉(zhuǎn)染效率也會差很多。尤其是對于最難轉(zhuǎn)染的干細胞，就更是令大家伙頭疼，甚至讓大家聞之色變。但是，屏幕前的讀者可能想不到，其實對于很多有經(jīng)驗的科研人員來說，在多能干細胞(PSC)和神經(jīng)干細胞(NSC)這些細胞中，照樣能獲得高達80%或更高的轉(zhuǎn)染效率，在間充質(zhì)干細胞(MSC)中獲得高達45%的轉(zhuǎn)染效率。至于他們是如何做到如此優(yōu)秀的？用的就是Zeta Life公司Advanced系列轉(zhuǎn)染試劑。各種細胞類型中最高的轉(zhuǎn)染效率。可用于多種真核細胞系的DNA轉(zhuǎn)染、siRNA轉(zhuǎn)染和共轉(zhuǎn)染；可用于各種原代細胞的DNA轉(zhuǎn)染、siRNA轉(zhuǎn)染；可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細胞、懸浮細胞、原代細胞、干細胞等。

五、轉(zhuǎn)染試劑選擇不對

轉(zhuǎn)染試劑的好壞，直接影響了細胞轉(zhuǎn)染實驗的成敗。如果，你對于現(xiàn)今市面上復雜的轉(zhuǎn)染試劑還不了解，那么這款Advanced DNA RNA Transfection Reagent就是你的*！

Advanced DNA RNA Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑采用中新型小分子多肽材料，包含了較為*的小分子材料轉(zhuǎn)染技術，能夠提供高效的轉(zhuǎn)染性能，改善相關應用的結(jié)果及可重復性。此試劑可將轉(zhuǎn)染效率提升數(shù)倍，并可改善細胞活性，廣泛適用于難轉(zhuǎn)染的及常見的細胞類型（例如RAW264.7細胞和THP-1細胞）。

1、有效轉(zhuǎn)染難于轉(zhuǎn)染的細胞

Advanced DNA RNA Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑專門針對難轉(zhuǎn)染的細胞種類進行了優(yōu)化，能夠為廣泛的細胞種類提供突出的轉(zhuǎn)染性能。即使是在原代細胞和干細胞等難轉(zhuǎn)細胞中，也能實現(xiàn)高效轉(zhuǎn)染。

2、助力癌癥研究

使用與癌癥相關的細胞系得到與您研究的問題相關的答案。憑借更廣的適用細胞類型、更高的轉(zhuǎn)染效率，Advanced DNA RNA Transfection Reagent轉(zhuǎn)染試劑讓您能夠靈活選擇研究所用的細胞系。

3、在低毒條件下獲得優(yōu)異的轉(zhuǎn)染效率

Advanced DNA RNA Transfection Reagent的多肽小分子用量在很寬的動態(tài)范圍內(nèi)均能保持很高的轉(zhuǎn)染效率，可按需進行簡便快速的條件優(yōu)化。在需要將細胞損傷降到至低的相關應用中。

4、在新型基因組編輯的相關應用中獲得高轉(zhuǎn)染效率

Advanced DNA RNA Transfection Reagent適用于新型基因組編輯的相關應用。通過高效率的轉(zhuǎn)染，它能夠增加TALEN或CRISPR系統(tǒng)剪切和重組的成功概率，最終使得基因修飾的效率實現(xiàn)，并簡化后續(xù)處理步驟。

與傳統(tǒng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的效果比較： 

以上說了這么多，也給大家安利了一些實用的產(chǎn)品，相信大家對于如何提高細胞轉(zhuǎn)染效率也更加有了信心。