-
如何做核提取物制備優(yōu)化？
發(fā)布時(shí)間： 2021-11-24 點(diǎn)擊次數(shù)： 1609次材料與儀器
轉(zhuǎn)瓶或單層培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞（如HeLa細(xì)胞）
高鹽緩沖液 分別含 0.8、1.0、1.2、1.4 及 1.6 mol L KCl
貝克曼 JS4. 2 轉(zhuǎn)子或相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)子 50 mL 圓錐形刻度聚丙烯離心管（對較小體積的提取物也可用 15 mL 的離心管） Dounce 氏玻璃勻漿器（B 型研杵） Beckman JA-20 離心轉(zhuǎn)子或相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)子磁性攪拌器或傾斜臺 管型透析膜（14000 MWCO） 電導(dǎo)計(jì)步驟
1)按基本方案中步驟1?8操作。
2)在低鹽緩沖液中重懸細(xì)胞核后（1/2體積pnv，見基本方案步驟8)，將細(xì)胞核懸液分成5等份。
3)在冷室內(nèi)不斷攪拌，按如下方法在每份懸液中加入1/3體積高鹽緩沖液：在第1份 中加KCl濃度低至（0.8 mol/L)的高鹽緩沖液，其余各份中依次加入KCl濃度逐 漸增高（直到1. 6 mol/L)的高鹽緩沖液。
4)確定在離心管斜面上有提取出的細(xì)胞核，輕輕混合30 min。
5)25000 g離心30 min,除掉核。
6)將上清輕輕倒出，進(jìn)行透析（見基本方案步驟12)，直到加KCl濃度最高的那份核懸液的電導(dǎo)率達(dá)到與透析液一致（100 mmol/L KCl)。提取物25000 g離心20 min。
7)檢測各份提取物的電導(dǎo)率并測定蛋白質(zhì)濃度（見基本方案步驟13和14)。
8)直接分析提取物或分裝到試管中，在液氮中速冷后放入-80℃保存。
產(chǎn)品中心
Products
-
血清系列
-
細(xì)胞轉(zhuǎn)染
-
支原體清除
-
細(xì)胞凍存
-
實(shí)驗(yàn)耗材
-
分子試劑
-
細(xì)胞增殖與凋亡
-
Biozellen系列
-
培養(yǎng)基
-
ELISA試劑盒
-
TOYOBO（東洋紡）
-
ZYMO RESEARCH
-
Greiner（格瑞納）
-
IKA（艾卡）
-
化學(xué)發(fā)光底物（ECL）
-
PROSPEC系列
-
Epigentek系列
-
微生物檢測
-
細(xì)胞生物學(xué)
-
Corning康寧
-
解離試劑
-
細(xì)胞類-實(shí)驗(yàn)耗材
-
原代細(xì)胞
-
植物檢測系列試劑盒
-
SERANA
-
細(xì)胞系
-
生化試劑盒
-
環(huán)境檢測系列試劑盒（AKEN）
-
類器官培養(yǎng)
-
緩沖器和解決方案
-
生物三凝膠基質(zhì)
-
細(xì)胞因子分子
-
生物樣本庫
-
蛋白研究系列
-
修飾檢測試劑盒
