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從海膽和沙幣等無脊椎動物系統獲取配子的實驗方法
發布時間： 2021-11-16 點擊次數： 1516次材料與儀器
海膽和沙幣
KCl 溶液 3-氨基-1 2 4-三唑
巴斯德吸管 Nytex 濾器步驟
一、海膽和沙幣體腔內注射 0.5 mol/L 的 KCl
1. 制備 0.5 mol/L 的 KCl 溶液。
2. 用海水沖洗一下動物以去掉顆粒物質。
3. 用一個 23~26 號的針頭向動物的口緣空腔內注射多達 500 μl 或 100 μl KCl。
4. 用巴斯德吸管收集“干"（米青）子，并儲存于置于冰上的小塑料管中。‘
5. 將雌性動物在一杯海水中翻過來收集卵子。
6. 用 Nytex 濾器洗卵子，以去掉顆粒，并使卵子吸附到濾膜上。
7. 通過將水吸走或小心倒掉，再加入潔凈的海水將卵子洗幾遍。
二、海膽的電刺激
1. 將海膽反口面向上放在紙巾上。
2. 將兩個電極一邊一個放在接近生殖管的貝殼部位，配子就會從生殖孔中釋放出來。
3. 如果需要，在生殖管周圍的幾個部位通以電流。
4. 開始收集卵子和（米青）子，并受精。
三、海膽和沙幣卵的受精
1. 制備稀釋的（米青）子懸液。
2. 向洗過的卵中加入（米青）子。
四、受精膜的去除
1. 獲取卵子。
2. 將卵子重懸于含有 1mmol/L 3-氨基-1,2,4-三唑的海水中。
3. 受精。
4. 當受精膜出現后，將卵子倒入直徑比卵子小幾微米的 Nytex 網中。
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