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高效率轉染N2a小鼠神經瘤母細胞的操作方法
發布時間： 2021-11-11 點擊次數： 2530次
轉染條件：
培養板：6孔板
轉染質粒DNA大小： 6000bp
轉染試劑用量：10ul
核酸用量：電訊
轉染時間：48小時
轉染試劑：Advanced DNA RNA轉染試劑（AD600150)
培養基：Z7181-500 胎牛血清
細胞凍存：CE70100T無血清細胞凍存液
操作步驟:
提前 1 天接種細胞：細胞匯合度在 60-80%左右，再進行轉染。
核酸復合物制備：將核酸與轉染試劑按照 1:1 關系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜 止 10-15 分鐘。
在細胞培養基中加入核酸復合物：根據參考用量在細胞中加入核酸復合物，并輕輕混勻；細胞培養基 里面可以含有血清。
細胞換液：轉染 24 小時后對細胞進行正常換液，懸浮細胞轉染過程中不用換液。
分析結果：質粒 DNA 轉染 48-72 小時后熒光檢測轉染效率，48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。若進行穩定表達細胞株的篩選，則在轉染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉染后 9 小時熒光檢測轉染效率，48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。
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